[자연과학] DNA의 추출 및 전기영동 experiment(실험)
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작성일 23-02-04 21:51
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[자연과학] DNA의 추출 및 전기영동 experiment(실험)
DNA, 추출, 전기영동
6) 침전물에 TE buffer를 30m L 넣습니다.
4) 3분간 원심분리 시킨 다음 0.4mL정도의 상층액을 새로운 튜브에 넣습니다.
아가로즈의 well에 DNA를 넣어줄때 DNA용액을 무겁게 하여 아가로즈의 홈으로 가라앉하는 역할을 하며 그 성분(成分)에 전기영동되는 속도가 다른 두개의 염색시약이 들어 있어 DNA와 같이 전기영동되며 DNA의 전기영동된 정도를 알 수 있게 하는 역할을 합니다. 이해되시죠? 이때 움직이는 속도는 DNA의 크기, 모양에 따라 다르므로 매질내에서 종류에 따라 분리되게 되요. 전기영동은 DNA의 크기, 분리, 양의 확인 등 모든 DNA조작과 매 단계에 있어 꼭 필요한 방법이지요. 전기영동을 하기 위하여 DNA용액을 아가로즈에 넣어 주려면 DNA용액을 넣기 위한 장소(well)가 필요해요. 아가로즈를 굳힐 때 빗 모양으로 생긴 comb을 꽂아, 굳으면 빼서 움푹 파인 홈을, DNA를 넣어 전기영동시키는 장소로써 사용하지요.
DNA의 추출 및 전기영동에 관한 experiment(실험) 보고서
2) 1.5mL tube에 배양액을 가득 붓고 20초간 원심분리 시킨 후, 배양액을 따라버리고 침전물에 100uL의 GTE 용액을 넣고 5분간 상온에 둡니다.
DNA의 추출 및 전기영동
5) 상온에서 3분간 원심분리 시킨 후 70% 에탄올 1mL로 침전물을 세척한 다음 진공에서 말립니다.
재료 ; loading 염색약, DNA 용액(프라미드 DNA, 식물 DNA, 제한효소로 자른 후 DNA용액), 메틸렌블루, 리가아제, 아가로즈
1) 멸균된 LB배지 5ml에 단일 박테리아 콜로니를 접종시킨 후, 37C에서 배양시킵니다.
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기구 ; 전기영동장치, 전원공급장치, 50 x TAE 용액, 팁(tip), 마이크로피펫(micropippet), 5mL 튜브
실험방법
DNA loading 염색약의 역할은 무엇일까요?
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1. 플라스미드의 추출
순서
재료
DNA의 추출 및 전기영동에 관한 실험 보고서
설명
LB medium(적당한 항생물질이 첨가된), Glucose/Tris/EDTA(GTE) solution, TE buffer, NaOH/SDS solution, Potassium acetate solution,(pH 4.8 ), 95% ,70% 에탄올
원리; 특별한 매질(아가로즈; 아가와 같이 용액을 굳히는 역할을 하며 아가보다 그 순도가 더 높습니다, 아크릴아마이드)을 이용하여 고분자 물질(DNA나 단백질)을 분리하는 방법이예요. 아가로즈(agarose)에 DNA를 넣고 전기를 걸어주면 DNA는 인산기 때문에 음전하를 띠므로 매질을 타고 양전하 방향으로 움직이게 됩니다.
2. 전기영동
150 m L의 potassium acetate 용액을 넣고 2초간 볼텍스(vortex)한 후, 5분간 얼음 속에 보관합니다.
3) 200uL의 NaOH/SDS 용액을 넣고 섞어준 다음 5분간 얼음 속에 보관합니다. 95% 에탄올을 0.8ml넣고, 2분간 상온에 둡니다.
다.
